Recoltarea probelor de tesut la salmonide
1. Se recolteaza o
portiune mica de tesut, preferbail din inotatoarea caudala
sau adipoasa, cu ajutorul unor foarfece sau unui bisturiu curate. Persoana
care colecteaza probele trebuie sa aiba mainile curate, fara mucus
sau solzi si foarfecele/ bisturiul trebuie sa fie bine clatite
intre doua colectari successive. Marimea portiunii de
inotatoare trebuie sa fie de aproximativ 5 cm2
(aproximativ jumatate din dimensiunea unei unghii), pentru extragerea ADN
din inotatoare fiind necesare aproximativ 50 mg de tesut. Daca
inotatoarea este prea mica, se recolteaza o portiune din
inotatoarea pelvica. Probele
pot fi recoltate din tesut proaspat sau inghetat.
2. Fiecare
proba de inotatoare va fi stocata separat in criotuburi sau
tuburi Eppendorf de 1,5 ml ce contin aproximativ 1 ml de etanol de
concentratie superioara (80- 96%). Este important ca intreaga
portiune de tesut sa fie complet imersata in alcool si
sa nu fie expusa contactului cu aerul (criotubul trebuie inchis etans). Expunerea la aer poate afecta calitatea ADN
ce urmeaza sa fie extras din tesut. Etanolul permite pastrarea
tesutului la temperatura camerei si nu este necesar ca recipientul cu
proba sa fie refrigerat.
Se va avea in vedere si greutatea
acvariului, tinand cont ca suportul pe care il vom pune sa reziste si sa nu se
curbeze (este periculos mai ales la acvariile lipite cu silicon-cauciuc, in
acest caz se poate sparge fundul). Se va tine cont si ca greutatea unui
acvariu nu este numai greutatea lui proprie ci si a nisipului, a apei, a
decorului, etc. La amplasarea unui acvariu mare (300+ l) intr-un apartament de
bloc se va tine seama si de rezistenta planseului si se va creea un suport care
sa distribuie greutatea pe o suprafata cat mai mare. Amplasarea unor astfel de
acvarii se va face cat mai langa pereti (unde sunt puncte de rezistenta) si pe
cat mai multe puncte de imbinare. Nu se va amplasa un astfel de acvariu in
mijlocul camerei!
&
Lumina alba
este un complex de 7 spectre de culoare: rosu, oranj, galben, verde,
albastru, indigo, violet = spectrul ROGVAIV. Pentru acvariu, cea mai buna
lumina este cea care are lungimea de unda cuprinsa intre 380-780 nm. In acest
spectru trebuie sa existe din toate aceste radiatii cate putin. Radiatiile sunt
fluctuante in timpul zilei si in functie de intemperii. La inceputul
acvaristicii s-a incercat cresterea plantelor doar la lumina zilei, dar s-a
constatat ca unele plante nu cresc deloc sau cresc foarte putin si asta mai
ales iarna, cand zilele sunt scurte si deci lumina este putina. Atunci s-a
trecut la iluminatul artificial si din acest punct de vedere amplasarea
acvariului a devenit independenta de
3. Fiecare
criotub se eticheteaza corespunzator pentru o identificare
ulterioara usoara a probelor. Informatiile continute
pe fiecare eticheta se refera la: specia de la care s-a colectat proba, localitatea, numarul probei,
data colectarii probei.
4. Depozitarea
probelor: probele trebuie ferite de variatii extreme de temperatura,
in special daca sunt stocate in etanol, pentru a evita afectarea
calitatii ADN.
Pentru extractia ADN cu bune
rezultate se pot utiliza si probe reprezentand tesut muscular
scheletic sau ficat. Aceste tesuturi dupa recoltare sunt depozitate
la -80sC, ulterior fiind folosite pentru extractia ADN.
